(Flowcytometrie, FCM) ass en Zellanalysator, deen d'Fluoreszenzintensitéit vu gefierfte Zellmarkéierer moosst. Et ass eng High-Tech-Technologie, déi op Basis vun der Analyse an der Sortéierung vun eenzelne Zellen entwéckelt gouf. Si kann d'Gréisst, d'intern Struktur, d'DNA, d'RNA, d'Proteinen, d'Antigenen an aner physikalesch oder chemesch Eegeschafte vu Zellen séier moossen a klassifizéieren, a kann op der Sammlung vun dëse Klassifikatiounen baséieren.
E Flowzytometer besteet haaptsächlech aus de folgende fënnef Deeler:
1 Duerchflusskammer a Fluidiksystem
2 Laserliichtquell a Straleformungssystem
3 Optescht System
4 Elektronik, Späicher-, Display- an Analysesystem
5 Zellsortéierungssystem
Dorënner ass d'Lasererregung an der Laserliichtquell an dem Stralebildungssystem déi wichtegst Miessung vu Flusenzsignaler an der Flowcytometrie. D'Intensitéit vum Erregungsliicht an d'Beliichtungszäit hänken mat der Intensitéit vum Flusenzsignal zesummen. De Laser ass eng kohärent Liichtquell, déi eng Beliichtung mat enger eenzeger Wellelängt, héijer Intensitéit an héijer Stabilitéit liwwere kann. Et ass déi ideal Erregungsliichtquell fir dës Ufuerderungen ze erfëllen.
Tëscht der Laserquell an der Flosskammer ginn et zwou zylindresch Lënsen. Dës Lënsen fokusséieren e Laserstral mat engem kreesfërmegen Querschnëtt, deen vun der Laserquell ausgestraalt gëtt, an en elliptesche Stral mat engem méi klenge Querschnëtt (22 μm × 66 μm). D'Laserenergie an dësem elliptesche Stral gëtt no enger Normalverdeelung verdeelt, wat eng konsequent Beliichtungsintensitéit fir Zellen garantéiert, déi duerch de Laserdetektiounsberäich passéieren. Op der anerer Säit besteet den optesche System aus verschiddene Sätz vu Lënsen, Lächer a Filteren, déi ongeféier an zwou Gruppen opgedeelt kënne ginn: vir- an no der Flosskammer.
Dat optescht System virun der Duerchflusskammer besteet aus enger Lëns an engem Lach. Déi Haaptfunktioun vun der Lëns an dem Lach (normalerweis zwou Lënsen an engem Lach) ass et, de Laserstral mat engem kreesfërmegen Querschnëtt, deen vun der Laserquell ausgestraalt gëtt, an en elliptesche Stral mat engem méi klenge Querschnëtt ze fokusséieren. Dëst verdeelt d'Laserenergie no enger Normalverdeelung, wouduerch eng konsequent Beliichtungsintensitéit fir Zellen iwwer de Laserdetektiounsberäich garantéiert gëtt an d'Interferenzen duerch Streiliicht miniméiert ginn.
Et ginn dräi Haaptzorte vu Filteren:
1: Laangpassfilter (LPF) - léisst nëmme Liicht mat Wellelängten, déi méi héich wéi e spezifesche Wäert sinn, duerch.
2: Kuerzduerchgangsfilter (SPF) - léisst nëmme Liicht mat Wellelängten ënner engem spezifesche Wäert duerch.
3: Bandpassfilter (BPF) - léisst nëmme Liicht an engem spezifesche Wellelängteberäich duerch.
Verschidde Kombinatioune vu Filtere kënnen Fluoreszenzsignaler mat verschiddene Wellelängten op eenzel Photomultiplierréier (PMTs) riichten. Zum Beispill sinn d'Filter fir d'Detektioun vu grénger Fluoreszenz (FITC) virum PMT LPF550 a BPF525. D'Filter, déi benotzt gi fir orange-rout Fluoreszenz (PE) virum PMT ze detectéieren, sinn LPF600 a BPF575. D'Filter fir d'Detektioun vu rouder Fluoreszenz (CY5) virum PMT sinn LPF650 a BPF675.
D'Flowcytometrie gëtt haaptsächlech fir d'Zellsortéierung benotzt. Mat dem Fortschrëtt vun der Computertechnologie, der Entwécklung vun der Immunologie an der Erfindung vun der monoklonaler Antikörpertechnologie ginn hir Uwendungen an der Biologie, Medizin, Pharmazie an anere Beräicher ëmmer méi verbreet. Dës Uwendungen ëmfaassen d'Zelldynamikanalyse, d'Zellapoptose, d'Zelltypiséierung, d'Tumordiagnos, d'Analyse vun der Medikamenteneffizienz, etc.
Zäitpunkt vun der Verëffentlechung: 21. September 2023
