(Flowzytometrie, FCM) ass en Zellanalysator deen d'Fluoreszenzintensitéit vu gefierften Zellmarker moosst. Et ass eng High-Tech Technologie entwéckelt baséiert op der Analyse an der Sortéierung vun eenzel Zellen. Et kann séier d'Gréisst, d'intern Struktur, d'DNA, d'RNA, d'Proteine, d'Antigene an aner kierperlech oder chemesch Eegeschafte vun Zellen moossen a klassifizéieren, a ka baséiert op der Sammlung vun dëse Klassifikatiounen.
Flowzytometer besteet haaptsächlech aus de folgende fënnef Deeler:
1 Flow Chamber a fluidics System
2 Laser Liichtquell a Strahlformungssystem
3 Optesch System
4 Elektronik, Stockage, Display an Analyse System
5 Zell Zortéieren System
Ënner hinnen ass d'Laserexcitatioun an der Laserlichtquell a Strahlbildungssystem d'Haaptmiessung vu Fluoreszenzsignaler an der Flowzytometrie. D'Intensitéit vum Excitatiounsliicht an d'Beliichtungszäit si mat der Intensitéit vum Fluoreszenzsignal verbonnen. Laser ass eng kohärent Liichtquell déi eenzeg Wellelängt, héich Intensitéit an héich Stabilitéit Beliichtung ubidden kann. Et ass déi ideal Opreegung Liichtquell fir dës Ufuerderungen z'erreechen.
Et ginn zwou zylindresch Lënsen tëscht der Laserquell an der Flowkammer. Dës Lënse konzentréieren e Laserstrahl mat engem kreesfërmegen Querschnitt aus der Laserquell an en ellipteschen Strahl mat engem méi klenge Querschnitt (22 μm × 66 μm). D'Laserenergie bannent dësem ellipteschen Strahl gëtt no enger normaler Verdeelung verdeelt, fir eng konsequent Beliichtungsintensitéit fir Zellen ze garantéieren, déi duerch d'Laser Detektiounsberäich passéieren. Op der anerer Säit besteet den opteschen System aus multiple Sätz vu Lënsen, Pinholes a Filteren, déi ongeféier an zwou Gruppen opgedeelt kënne ginn: Upstream an Downstream vun der Flowkammer.
Den opteschen System virun der Flowkammer besteet aus enger Lens a Pinhole. D'Haaptfunktioun vun der Lens a Pinhole (normalerweis zwou Lënsen an e Pinhole) ass de Laserstrahl mat engem kreesfërmege Querschnitt, deen vun der Laserquell emittéiert ass, an en ellipteschen Strahl mat engem méi klenge Querschnitt ze fokusséieren. Dëst verdeelt d'Laserenergie no enger normaler Verdeelung, suergt fir eng konsequent Beliichtungsintensitéit fir Zellen iwwer d'Laser Detektiounsberäich a miniméiert d'Interferenz vu Sträiflicht.
Et ginn dräi Haaptarten vu Filteren:
1: Laangpassfilter (LPF) - erlaabt nëmme Liicht mat Wellelängten méi héich wéi e spezifesche Wäert duerch ze goen.
2: Kuerzpassfilter (SPF) - erlaabt nëmme Liicht mat Wellelängten ënner engem spezifesche Wäert duerch ze goen.
3: Bandpassfilter (BPF) - erlaabt nëmme Liicht an engem spezifesche Wellelängtberäich duerch ze goen.
Verschidde Kombinatioune vu Filtere kënne Fluoreszenzsignaler op verschiddene Wellelängten op eenzel Photomultiplikatorröhre (PMTs) riichten. Zum Beispill Filtere fir gréng Fluoreszenz (FITC) virun PMT z'entdecken sinn LPF550 a BPF525. D'Filtere benotzt fir orange-rout Fluoreszenz (PE) virum PMT z'entdecken sinn LPF600 a BPF575. D'Filtere fir rout Fluoreszenz (CY5) virum PMT z'entdecken sinn LPF650 a BPF675.
Flowzytometrie gëtt haaptsächlech fir Zellsortéierung benotzt. Mat dem Fortschrëtt vun der Computertechnologie, der Entwécklung vun der Immunologie an der Erfindung vun der monoklonaler Antikörpertechnologie, ginn hir Uwendungen an der Biologie, Medizin, Apdikt an aner Felder ëmmer méi verbreet. Dës Uwendungen enthalen Zelldynamik Analyse, Zellapoptose, Zelltyping, Tumordiagnos, Medikamenteffizienz Analyse, etc.
Post Zäit: Sep-21-2023
